洪武十五年（1382年），沐英和蓝玉领兵西攻割据大理的段氏。段氏聚众守在点苍山。沐英身先士卒，策马渡河，将士在他的后面跟随。段氏不知背后虚实，阵势溃乱，兵败被俘。攻占大理后，云南西部大部归附明朝。洪武十五年（1382年）七月，沐英，和傅友德合兵，分道平定云南诸蛮，设立乌撒、毕节二卫。洪武十五年（1382年），云南土官杨苴纠集了二十万叛军攻打昆明。当时昆明城中缺粮，多数士兵生病，形势危急。沐英闻讯，率兵返回昆明，和守军合力，打败叛军，斩首六万，守住昆明，稳定了局势。
洪武十六年（1383年），朱元璋下诏命傅友德及蓝玉班师回朝，而留下沐英镇守云南。洪武十七年（1384年），曲靖酋长作乱，沐英将其征讨降服。并趁机平定普定、广南诸蛮，打通田州粮道。洪武十九年（1386年），沐英上疏朱元璋，请求让军队屯田开垦。朱元璋同意了沐英建议。洪武二十年（1387年），沐英平定浪穹蛮族，并奉诏自永宁至大理，每六十里设一堡垒，留下军队屯田。
洪武二十一年（1388年），麓川国主思伦发反叛，入侵摩沙勒寨，沐英派遣都督宁正率军将其击败。次年，思伦发再次侵犯定边，军队号称三十万。沐英挑选骑兵三万奔往援救，设置三行火炮劲弩。蛮军驱赶百象，身披甲衣。沐英将军队分成三路进攻。明军炮弩齐发，象都掉头而跑。大军乘机冲杀，斩首四万余人，生获三十七头象，其余的象全被射死。蛮贼将帅各遭百余箭，伏在象背死去。定边之战，明军大获全胜，思伦发逃走，诸蛮深受震慑，麓川从此不再被阻塞。不久，沐英会合傅友德讨平东川蛮，又平息越州酋长阿资及广西阿赤部。
云南平定后，沐英留滇镇守，其镇滇南十年间，大兴屯田，劝课农桑，礼贤兴学，传播中原文化，安定边疆。洪武十五年（1382年），沐英因义母马皇后病逝，悲伤过度而咳血。洪武二十五年（1392年），沐英因太子朱标的去世，遭受打击，两个月后病逝于云南，年仅四十八岁。朱元璋倍感痛惜，命归葬京师，追封黔宁王，赐谥"昭靖"，侑享太庙。此后，沐氏子孙世代镇守云南，直至明末。
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