1940年，驻扎在平房镇的731部队正式扩编至3000人，在扩编之后驻地也随之关押了许多的战犯俘虏，这些俘虏就是731立足试验的基本，他们被称之为“马路他”。
俘虏主要是以下几种：
1.东北各地抵挡日本侵略被抓的中国人，夹杂伪满洲国之人。
2.东北抗联战士。
3.不服从日军管教的零散土匪。
4.被日军强行指认为是苏联间谍的平民。
5.少量的苏联以及朝鲜人。
令人头皮发麻的试验，恶魔本性
731部队是如何对待关押的囚犯呢？
根据当时731部队中的士兵称：“他们在医生的指导下，将伤寒病菌混入糖水之中，让几十名囚犯去喝下混有病菌的糖水，这些人在喝下糖水之后会感染伤寒，而医生们则观察病人的病情进展。”
一次试验，死亡人数近半，在没有救治的情况下活活病死。
鼠疫是最恐怖的瘟疫之一，为了研究鼠疫的传播和源头，731部队特意将驻地一间平房改造，然后从老鼠身上抓取大量跳蚤放置其中，最后将囚犯关押在房间之中，让所有囚犯都患上鼠疫。刚刚进去的犯人根本不知道这是病毒研究室，只觉得跳蚤很多，随之而来是身上被叮咬，然后痒、疼以及皮肤出血随之而来，最后在痛苦中死去。
冻伤是731部队的试验一环，为此731部队花费巨资建立了“冻伤研究室”，主要研究人体在寒冷情况下从生到死的过程。
