道光二十九年，苏三娘的队伍已经发展到2000人，带领手下加入太平军，参加了金田起义，凭着卓越的战功被封为女将领。在之后与清朝军队的交战中，她的表现非常亮眼，武艺高强又指挥出色，为太平天国立下汗马功劳，被称为太平军的"最美女将军"。天王洪秀全非常欣赏她，将她提拔为女兵营副总管，地位仅次于洪宣娇。
太平军攻破南京后，正式成立太平天国，苏三娘在长期的战斗中，与将领罗大纲日久生情，成为了一段佳话。两人同为将军，却不能常在一起，咸丰三年罗大纲被调往江西前线，而苏三娘却安排在镇江守城。不懂清军哪里来的消息，知道罗大纲不再就下令死命攻城。
