梁王在窦太后和汉景帝面前一个劲给周亚夫上眼药水，汉景帝也不是昏君，不可能全部听信弟弟说的。但周亚夫性格倔强认死理，又觉得自己是老臣，说话有分量，常常让汉景帝下不来台。汉景帝想废太子，周亚夫反对；汉景帝想给投降汉朝的匈奴将军封侯，周亚夫还反对。
他的理由是，规矩不能轻易改，要是这些背叛自己国家的人都能封侯，那我大汉朝的其他人也去投降匈奴，岂不还成了好事了？一来二去，汉景帝觉得自己让周亚夫做丞相实在是大大失策，不由得冷落了他。他设宴请周亚夫吃饭，周亚夫见座子上没摆餐具，又大怒拍案而起。
于是，汉景帝连让他将来辅佐少主刘彻的心思都歇了。公元前143年，周亚夫因为涉嫌谋逆大罪被抓去下狱，他受不了廷尉的嘲讽话，便直接绝食抗议，没几天就死了。这时距离他被拜为丞相刚好过去9年，距离他得到那个预言刚好过去17年。不过也有人评价说："削平吴楚大功成，一旦生疑触怒霆。自是君王多任刻，非关许负相书灵！"
